在mRNA-LNP技术的研究中，包封率是衡量递送系统效能的关键指标之一。包封率表示被脂质纳米颗粒包裹的RNA占所有RNA的比例，是决定LNP药物制剂精准给药剂量的基础。在LNP的早期开发和后期生产质控中，这一指标得到了广泛应用。高包封率意味着更多的mRNA能够稳定地被包裹在脂质纳米颗粒中，进而提高靶向递送的效率，并降低游离mRNA引发的免疫原性风险，确保疫苗开发和基因治疗等应用的安全性和有效性。

为测定包封率，2023版美国药典《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》推荐使用基于RiboGreen的荧光检测方法。当RiboGreen特异性插入核酸后，能够发出绿色荧光，从而实现对RNA的定量，检测下限可低至1ng/ml。此外，安捷伦的科学家们还尝试使用片段分析仪系统来测定包封效率，凭借其优秀的性能表现，可作为替代方法。该系统通过平行毛细管电泳分离样品，提供完整性、纯度和片段大小等多项指标，并支持定量分析，可在测定包封率的同时检测IVTmRNA的残留浓度。

研究方法

1.样本准备：将包封后的终产物处理，以检测残留IVTmRNA的浓度。在室温下用表面活性剂处理20分钟，以释放IVTmRNA并检测总IVTmRNA的浓度。

2.仪器分析：使用Agilent5300 FragmentAnalyzer系统和Agilent HSRNA kit（DNF-472）进行样品分析。

3.RiboGreen检测：样品通过RiboGreen试剂盒（Quant-it RiboGreen RNA Assay Kit）以及Agilent BioTek Synergy LX多功能微孔板检测仪进行分析，以获取总IVTmRNA的定量测量。

4.包封效率计算：通过下述公式计算包封效率，其中Concentration Total IVTmRNA表示总IVTmRNA的浓度，Concentration Residual IVTmRNA表示残留IVTmRNA的浓度。

结果与分析

1.精度和重复性：多轮实验表明精度高，三次实验的总CV小于11%。单次实验中多次测量的CV为33%，显示出良好的可重复性。

2.线性范围：FragmentAnalyzer系统提供了优秀的定量线性，残留IVTmRNA和破封后产物的R²值分别为0.96和0.99，显示出系统的稳健性和可靠性。

3.封装效率比较：对不同浓度样品进行评估后发现，FragmentAnalyzer系统和RiboGreen试剂盒的结果相似。在10ng/μl和5ng/μl浓度下，FragmentAnalyzer的封装效率分别为92.4%和92%，与RiboGreen的结果一致。

4.系统稳健性：在不同天对同一样品进行多次测量，FragmentAnalyzer系统的封装效率相对稳定，两天内的结果为92%和90%，而RiboGreen的结果为98%和91%。

结论

Agilent FragmentAnalyzer系统通过平行毛细管电泳技术实现核酸的定量与定性分析，常用于IVTmRNA的表征。这一系统不仅能够评估包封效率，还可以用于完整性、大小及纯度等其他关键质量属性（CQA）的评估。利用FragmentAnalyzer系统，使IVTmRNA的CQA工作流程更加简单，所有表征所需的检测均可在单一平台上完成，提升实验效率。

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